原代細(xì)胞分離純化

單個(gè)細(xì)胞分離培養(yǎng)技術(shù)（細(xì)胞克隆技術(shù)），即從細(xì)胞群體中分離出一個(gè)細(xì)胞，并使其在體外培養(yǎng)體系中能繁殖成新的細(xì)胞群體，這種由單個(gè)細(xì)胞所形成的細(xì)胞群（或集落）稱為一個(gè)克隆，這種純化后的細(xì)胞群體稱為細(xì)胞株。有以下5種常采用的方法：毛細(xì)管克隆法、有限稀釋克隆法、平皿克隆分離法、軟瓊脂克隆分離法、單細(xì)胞顯微克隆法。

細(xì)胞的純化

細(xì)胞的純化分為自然純化和人工純化，主要采用以下5種方法：

1．細(xì)胞因子依賴純化法：加入某些特殊的細(xì)胞因子從而使細(xì)胞達(dá)到純化，但是此方法有依賴性，加入之后每次培養(yǎng)細(xì)胞都需要因子培養(yǎng)。

2．酶消化法：利用上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞對(duì)胰蛋白酶的耐受性不同，達(dá)到純化的目的。此方法也可對(duì)貼壁細(xì)胞與半貼壁及粘附細(xì)胞間的分離純化。

（1）上皮細(xì)胞與成纖維細(xì)胞的分離純化

需要在胰蛋白酶的作用下，讓成纖維細(xì)胞先脫壁，從而得到上皮細(xì)胞。

（2）骨髓基質(zhì)肌樣細(xì)胞的純化

同樣適用酶消化法使粘附細(xì)胞脫壁分離，讓骨髓基質(zhì)細(xì)胞或血液中肌樣細(xì)胞與淋巴細(xì)胞分開(kāi)和純化。

3．反復(fù)貼壁法

成纖維細(xì)胞其貼壁過(guò)程快，能在短時(shí)間內(nèi)完成附著過(guò)程，而上皮細(xì)胞在短時(shí)間內(nèi)不能附著或附著不穩(wěn)定，稍加振蕩即浮起，利用此差別可以純化細(xì)胞。

4．電烙篩選法

貼壁細(xì)胞在轉(zhuǎn)化時(shí)，細(xì)胞層中會(huì)出現(xiàn)分散的轉(zhuǎn)化灶，細(xì)胞密集、排列規(guī)則，有明顯生長(zhǎng)趨勢(shì)，與周邊未能轉(zhuǎn)化的細(xì)胞有明顯的區(qū)域界限，可用機(jī)械刮除法去除或用電烙篩選法燙死未轉(zhuǎn)化細(xì)胞而保留轉(zhuǎn)化灶細(xì)胞。

5．機(jī)械刮除法

此方法去除不需要的細(xì)胞區(qū)域而保留需要的細(xì)胞區(qū)域，適用于上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞分離純化。